近年來腫瘤免疫治療因其顯著療效和創(chuàng)新性備受關(guān)注，是腫瘤治療中最具有前景的研究方向之一。CRISPR基因編輯系統(tǒng)的發(fā)展以及其在多領(lǐng)域的延伸應(yīng)用讓研究者看到了它的巨大潛力，在腫瘤免疫治療研究中也顯示出廣泛的應(yīng)用前景。在過繼性細(xì)胞治療中，主要通過分離患者自身的T細(xì)胞進(jìn)行個(gè)體化回輸，因受到分離T細(xì)胞的數(shù)量和異體排斥的影響，不利于大規(guī)模臨床應(yīng)用。利用CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)構(gòu)建健康人來源的通用型T細(xì)胞則可避免這種限制。CRISPR/Cas9可對(duì)TCR-T和CAR-T細(xì)胞的內(nèi)源性TCR以及HLA-Ⅰ分子的基因進(jìn)行敲除得到通用型效應(yīng)細(xì)胞。

多基因敲除的研究，基本是在T**細(xì)胞上完成的，在CAR-T上進(jìn)行多基因敲除既要完成基因敲除又要實(shí)現(xiàn)CAR-T的表達(dá)在技術(shù)上實(shí)現(xiàn)較為困難。脂質(zhì)體法、磷酸鈣法等常規(guī)方法難以實(shí)現(xiàn)針對(duì)免疫細(xì)胞的高效轉(zhuǎn)染。利用病毒載體多次感染帶有要敲除的目的基因的sgRNA的CRISPR/Cas9載體和CAR載體，并且因多次病毒感染細(xì)胞活性降低，因此只能用電轉(zhuǎn)才能實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)染載體的目的。

我們來看下腫瘤免疫治療先驅(qū)之一CarlJune教授是怎樣實(shí)現(xiàn)高效CRISPR編輯T細(xì)胞的。2016年11月CarlJune教授在Clinical Cancer Research雜志上發(fā)表一篇論文（Multiplexgenome editing to generate universal CAR T cells resistant to PD1 inhibition），在這篇文章的PROTOCOL中詳細(xì)介紹了如何通過CRISPR/Cas9技術(shù)對(duì)T細(xì)胞進(jìn)行高效編輯，細(xì)胞轉(zhuǎn)染的部分都是通過BTX電轉(zhuǎn)儀實(shí)現(xiàn)的。

2. 將TCR的α和β鏈共轉(zhuǎn)到T細(xì)胞

3. CRISPR/Cas9敲除TCR,B2M和PD1，消除CAR-T內(nèi)源性

階段，BTX 電穿孔系統(tǒng)由于它的易用性、重復(fù)性、高效率和低毒性，為CAR-T和CRISPR等尖端科研提供有力的保障。

高配系統(tǒng)：GeminiX2

·        可電穿孔任何種類細(xì)胞-提供方波和指數(shù)衰減波兩種波形

·        觸摸屏使用界面

·        包含“PRESET CRISPR”等預(yù)設(shè)程序，使用方便

·        海量數(shù)據(jù)記錄，可實(shí)現(xiàn)更快優(yōu)化

·        用戶可進(jìn)行程序完全自定義控制，便于優(yōu)化

·        可與電極杯、活體鑷子電極、高通量電擊室等配合使用

經(jīng)典系統(tǒng)：ECM830

·        靈活而高效的方波電轉(zhuǎn)染系統(tǒng)

·        助力CRISPR技術(shù)，諸多文獻(xiàn)應(yīng)用記錄

·        可用電壓范圍廣

·        可與電極杯、活體鑷子電極、高通量電擊室等配合使用